Die qRT-PCR (quantitative Reverse Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion) ist eine Methode, die zur Bestimmung von Nukleinsäuren (DNA oder RNA) in einer Probe genutzt wird und quantitative Analysen von Genexpression und Viren ermöglicht. Sie wird in verschiedenen Branchen eingesetzt, darunter die medizinische Forschung, die Lebensmittelindustrie, die Umweltüberwachung und die forensische Wissenschaft.
Durch eine hohe Sensitivität, Genauigkeit und Reproduzierbarkeit ist die qRT-PCR eine wichtige Labor-Methode die unter anderem die Identifizierung von Krankheitserregern, die Überwachung von Umweltverschmutzung und die Qualitätskontrolle von Lebensmitteln ermöglicht und somit zur Verbesserung von Diagnoseverfahren, Forschungsergebnissen und Produktqualität beiträgt.
Zielgruppe
Für wen ist das Seminar interessant
- Technische und wissenschaftliche Mitarbeitende aus der akademischen, industriellen und klinischen Forschung.
- Mitarbeitende aus der Qualitätkontrolle und Assayentwicklung, die nukleinsäure-basierte Verfahren anwenden.
Lernziele
Nach dem Seminar
- haben Sie die Grundlagen einer quantitativen PCR aufgefrischt und die Besonderheiten, Stärken und Schwächen der Messtechnik erhalten.
- haben Sie gelernt, wie ein qPCR Assay designed, etabliert und validiert wird.
- sind Ihnen Beispiele für typische Fehlerquellen sowie deren Lösungen bekannt und Sie sind in der Lage diese Lösungsansätze in Ihr Labor zu übertragen.
- haben Sie einen Überblick über gängige Methoden zur Datenauswertung, die anhand von Rechenbeispielen vertieft wurden, erhalten.
Programm
qPCR Grundlagen
- Funktionsprinzip einer qPCR
- Vergleich PCR (Northern Blot), qPCR mit Stärken und Schwächen
- Funktionsprinzip der verschiedenen Detektionsreagenzien (Farbstoff, Sonde)
- Anwendungsfälle einer qPCR mit kurzen Beispielen anhand von Kundenfällen
- Wo macht es Sinn, wo nicht?
- Gängige qPCR-Geräte und -Verbrauchsmaterialien
- Typische Kosten eines qPCR-Assays
- Kostenvergleich mit End-Punkt PCR, NGS
- qPCR-Parameter
- Phasen, Cq, Fluoreszenz
- Schmelzkurven
- Wie und warum?
- Wie werden Proben miteinander verglichen?
qPCR Assay Design
- Wie designe/etabliere ich einen qPCR-Assay?
- Worauf muss ich bei einer reversen Transkription achten?
- Primer, Amplikons
- Multiplexing
- Notwendige Kontrollen
- Referenzgene - How To
- Protokoll und Handling eines qPCR-Assays
- 1-Step vs. 2-Step qPCR
qPCR Assay Validation
- Was sagen uns die Kontrollen?
- Welche qPCR-Parameter kann ich als Qualitätskontrolle des Assays verwenden?
- Linear Dynamic Range und Primer Efficiency
- Ist ein Agarosegel zur Assayvalidierung notwendig?
- Darf man Reagenzien innerhalb einer Versuchsreihe austauschen?
qPCR Troubleshooting (Beispiele, Modelle)
- PCR-Inhibition
- Welchen Einfluss hat die DNA/cDNA Konzentration?
- Replikate (technisch/biologisch)
- Niedrige Fluoreszenzwerte/Baseline
- Was sagen Schmelzkurven über die Assayqualität?
- Welcher Einfluss hat die Primer Konzentration?
Datenanalyse
- Verfügbare Software
- Strategien / Modelle zur Datenauswertung
- PCR-Effizienz pro Reaktion berechnen
- ddCt
- Relative Quantities
- Effizienzkorrektur
- ddCt vs. Relative Quantities
Referent
Das fanden Teilnehmende besonders gut:
Sehr viel Praxisbezug, ich bin alle Fragen losgeworden.
Besonders gut, das ganze Auftreten/Vortrag. Die Umfrage-Funktion innerhalb der Schulung fand ich auch prima (kannte ich vorher nicht).
Besonders gut, Aufbau und Struktur, Beispiele aus der Praxis.
Sie haben Fragen?
Rufen Sie uns an
+49 681 98210-0
Mo - Do von 8:00 - 17:00 Uhr
und Fr von 8:00 - 16:00 Uhr
Elke Bonny
Seminarbetreuung
Fragen und Antworten
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