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Quantitative PCR (qPCR) - Durchführung, Interpretation und Troubleshooting
Eintägiges Seminar
ID: PCR-A
Teilnahmebedingungen:
Alle Informationen zu Reservierung, Buchung, Veranstaltungsunterlagen und Teilnahmebescheinigung finden Sie in unseren Teilnahmebedingungen für offene Veranstaltungen.
Zielgruppe
Für wen ist das Seminar interessant
- Technische und wissenschaftliche Mitarbeitende aus der akademischen, industriellen und klinischen Forschung.
- Mitarbeitende aus der Qualitätkontrolle und Assayentwicklung, die nukleinsäure-basierte Verfahren anwenden.
- Technische und wissenschaftliche Mitarbeitende aus der akademischen, industriellen und klinischen Forschung.
- Mitarbeitende aus der Qualitätkontrolle und Assayentwicklung, die nukleinsäure-basierte Verfahren anwenden.
Lernziele
Nach dem Seminar
- haben Sie die Grundlagen einer quantitativen PCR aufgefrischt und die Besonderheiten, Stärken und Schwächen der Messtechnik erhalten.
- haben Sie gelernt, wie ein qPCR Assay designed, etabliert und validiert wird.
- sind Ihnen Beispiele für typische Fehlerquellen sowie deren Lösungen bekannt und Sie sind in der Lage diese Lösungsansätze in Ihr Labor zu übertragen.
- haben Sie einen Überblick über gängige Methoden zur Datenauswertung, die anhand von Rechenbeispielen vertieft wurden, erhalten.
- haben Sie die Grundlagen einer quantitativen PCR aufgefrischt und die Besonderheiten, Stärken und Schwächen der Messtechnik erhalten.
- haben Sie gelernt, wie ein qPCR Assay designed, etabliert und validiert wird.
- sind Ihnen Beispiele für typische Fehlerquellen sowie deren Lösungen bekannt und Sie sind in der Lage diese Lösungsansätze in Ihr Labor zu übertragen.
- haben Sie einen Überblick über gängige Methoden zur Datenauswertung, die anhand von Rechenbeispielen vertieft wurden, erhalten.
Termin
Referent:in
Preis
| 16.11.2023 Online |  |
550,00 € zzgl. MwSt.
(654,50 € inkl. MwSt.)
(654,50 € inkl. MwSt.)
Inhalte
qPCR Grundlagen
qPCR Assay Design
qPCR Assay Validation
qPCR Troubleshooting (Beispiele, Modelle)
Daten Analyse
qPCR Grundlagen
- Funktionsprinzip einer qPCR
- Vergleich PCR (Northern Blot), qPCR mit Stärken und Schwächen
- Funktionsprinzip der verschiedenen Detektionsreagenzien (Farbstoff, Sonde)
- Anwendungsfälle einer qPCR mit kurzen Beispielen anhand von Kundenfällen
- Wo macht es Sinn, wo nicht?
- Gängige qPCR-Geräte und -Verbrauchsmaterialien
- Typische Kosten eines qPCR-Assays
- Kostenvergleich mit End-Punkt PCR, NGS
- qPCR-Parameter
- Phasen, Cq, Fluoreszenz
- Schmelzkurven
- Wie und warum?
- Wie werden Proben miteinander verglichen?
- Wie designe/etabliere ich einen qPCR-Assay?
- Worauf muss ich bei einer reversen Transkription achten?
- Primer, Amplikons
- Multiplexing
- Notwendige Kontrollen
- Referenzgene - How To
- Protokoll und Handling eines qPCR-Assays
- 1-Step vs. 2-Step qPCR
- Was sagen uns die Kontrollen?
- Welche qPCR-Parameter kann ich als Qualitätskontrolle des Assays verwenden?
- Linear Dynamic Range und Primer Efficiency
- Ist ein Agarosegel zur Assayvalidierung notwendig?
- Darf man Reagenzien innerhalb einer Versuchsreihe austauschen?
- PCR-Inhibition
- Welchen Einfluss hat die DNA/cDNA Konzentration?
- Replikate (technisch/biologisch)
- Niedrige Fluoreszenzwerte/Baseline
- Was sagen Schmelzkurven über die Assayqualität?
- Welcher Einfluss hat die Primer Konzentration?
- Verfügbare Software
- Strategien / Modelle zur Datenauswertung
- PCR-Effizienz pro Reaktion berechnen
- ddCt
- Relative Quantities
- Effizienzkorrektur
- ddCt vs. Relative Quantities
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Gerne klären wir mit Ihnen die Möglichkeit eines Inhouse-Seminars!
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